Expresión de la porción soluble del receptor neonatal humano recombinante (rhFcRnsol) empleando células de mamífero.
El receptor neonatal para el Fc (FcRn) es una proteína heterodimérica similar al complejo mayor de histocompatibilidad de clase I (MHC I). Este receptor está localizado principalmente en endosomas y puede unirse a la albúmina sérica (SA) e inmunoglobulina G (IgG) en un proceso estrictamente depend...
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| Otros Autores: | , |
| Formato: | Tesis Libro |
| Lenguaje: | Spanish |
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| Sumario: | El receptor neonatal para el Fc (FcRn) es una proteína heterodimérica similar al complejo mayor de histocompatibilidad de clase I (MHC I). Este receptor está localizado principalmente en endosomas y puede unirse a la albúmina sérica (SA) e inmunoglobulina G (IgG) en un proceso estrictamente dependiente del pH, protegiendo a ambos ligandos de la degradación lisosomal y prolongando así su vida media en circulación. La determinación de la afinidad in vitro del FcRn humano producido en forma recombinante (rhFcRn) a anticuerpos terapéuticos, proteínas de fusión al Fc o conjugadas a SA permite predecir la vida media plasmáticas de estas moléculas, lo que constituye parte del desarrollo de los estudios pre-clínicos de las mismas. La expresión del rhFcRn representa un desafío ya que es una proteína heterodimérica de membrana, y cuya estequiometría y patrón de glicosilación influencian la funcionalidad y estabilidad de la molécula. En este trabajo se describe la obtención del heterodimérico rhFcRn en forma soluble (rhFcRnsol) y de una molécula soluble de simple cadena (rhFcRnsc) mediante la transfección de células de mamífero CHOK1 y HEK293 en adherencia, y mediante la transducción de células HEK293 en adherencia y suspensión. Ambas proteínas fueron detectadas en los sobrenadantes de cultivos y se demostró su funcionalidad mediante la unión al Fcy1 en forma dependiente del pH a través de un ensayo de inmunoprecipitación. La estrategia aquí empleada proporciona un reactivo analítico de extrema utilidad en el desarrollo y la evaluación de anticuerpos y otras proteínas de fusión a Fc con potencial uso terapéutico. |
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| descripción de la copia: | Lugar de realización: Centro Biotecnológico del Litoral (FBCB) Disponible sólo en cd. |
| Descripción Física: | 1 cd. il. 12 cm. |
| Formato: | Requerimientos del sistema: lector de Adobe reader. |