Expresión de la porción soluble del receptor neonatal humano recombinante (rhFcRnsol) empleando células de mamífero. - Tolopka, Juan Ignacio
El receptor neonatal para el Fc (FcRn) es una proteína heterodimérica similar al complejo mayor de histocompatibilidad de clase I (MHC I). Este receptor está localizado principalmente en endosomas y puede unirse a la albúmina sérica (SA) e inmunoglobulina G (IgG) en un proceso estrictamente dependiente del pH, protegiendo a ambos ligandos de la degradación lisosomal y prolongando así su vida media en circulación. La determinación de la afinidad in vitro del FcRn humano producido en forma recombinante (rhFcRn) a anticuerpos terapéuticos, proteínas de fusión al Fc o conjugadas a SA permite predecir la vida media plasmáticas de estas moléculas, lo que constituye parte del desarrollo de los estudios pre-clínicos de las mismas. La expresión del rhFcRn representa un desafío ya que es una proteína heterodimérica de membrana, y cuya estequiometría y patrón de glicosilación influencian la funcionalidad y estabilidad de la molécula. En este trabajo se describe la obtención del heterodimérico rhFcRn en forma soluble (rhFcRnsol) y de una molécula soluble de simple cadena (rhFcRnsc) mediante la transfección de células de mamífero CHOK1 y HEK293 en adherencia, y mediante la transducción de células HEK293 en adherencia y suspensión. Ambas proteínas fueron detectadas en los sobrenadantes de cultivos y se demostró su funcionalidad mediante la unión al Fcy1 en forma dependiente del pH a través de un ensayo de inmunoprecipitación. La estrategia aquí empleada proporciona un reactivo analítico de extrema utilidad en el desarrollo y la evaluación de anticuerpos y otras proteínas de fusión a Fc con potencial uso terapéutico.