Uso de Chelex-100 para o diagnóstico molecular de cinco patógenos animais
As técnicas moleculares têm contribuído para melhorar o diagnóstico veterinário tradicional e a extração de ácido nucléico é crucial. O objetivo deste trabalho foi comparar o método de extração de DNA Chelex-100 (M1) com papel Whatman (M2), fenol-clorofórmio (M3) ou kits comerciais (M4), e determina...
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| Publicado: |
Universidad Nacional del Litoral
2021
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| Acceso en línea: | https://bibliotecavirtual.unl.edu.ar/publicaciones/index.php/FAVEveterinaria/article/view/9724 |
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As técnicas moleculares têm contribuído para melhorar o diagnóstico veterinário tradicional e a extração de ácido nucléico é crucial. O objetivo deste trabalho foi comparar o método de extração de DNA Chelex-100 (M1) com papel Whatman (M2), fenol-clorofórmio (M3) ou kits comerciais (M4), e determinar um método sensível e de baixo custo para o diagnóstico de patógenos animais economicamente ou zoonoticamente relevantes recebendo pouca atenção. Da urina, órgãos, sêmen, sangue e mucosa intestinal, foi extraído DNA das bactérias Leptospira interrogans sorovar Pomona Pomona (com M1 e M2), Brucella melitensis (com M1, M3 e M4), Salmonella ser. Abortusequi (M1 e M4), e da Leishmania spp. (M1, M3 e M4) e Eimeria spp. (M1 e M3), respectivamente. A sensibilidade dos protocolos foi analisada por PCR. O método M1 demonstrou sensibilidade semelhante para S. Abortusequi, Leishmania spp. e Eimeria spp., sendo melhor para L. interrogans e ligeiramente inferior para B. melitensis. Pela primeira vez, um método simples e barato de extração de DNA foi utilizado com sucesso nesses patógenos veterinários, especialmente importante em laboratórios com poucos recursos econômicos, contribuindo para o diagnóstico de leptospirose, brucelose, leishmaniose e coccidiose, bem como para a epidemiologia molecular de salmonelose em amostras de sêmen equino. |
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TOMAZIC, Mariela Luján HAMER, Micaela BUSTOS, Carla Paola ARREGUI, Matías ASCENCIO, Mariano SARAULLO, Vanina WATANABE, Olivia BRIHUEGA, Bibiana RODRIGUEZ, Anabel Elisa GRUNE-LOFFLER, Sylvia |
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oai:bibliotecavirtual.unl.edu.ar:article-97242021-04-12T19:14:18Z Uso de Chelex-100 para o diagnóstico molecular de cinco patógenos animais Uso de Chelex-100 para el diagnóstico molecular de cinco patógenos de animales Use of Chelex-100 for the molecular diagnosis of five animal pathogens TOMAZIC, Mariela Luján HAMER, Micaela BUSTOS, Carla Paola ARREGUI, Matías ASCENCIO, Mariano SARAULLO, Vanina WATANABE, Olivia BRIHUEGA, Bibiana RODRIGUEZ, Anabel Elisa GRUNE-LOFFLER, Sylvia As técnicas moleculares têm contribuído para melhorar o diagnóstico veterinário tradicional e a extração de ácido nucléico é crucial. O objetivo deste trabalho foi comparar o método de extração de DNA Chelex-100 (M1) com papel Whatman (M2), fenol-clorofórmio (M3) ou kits comerciais (M4), e determinar um método sensível e de baixo custo para o diagnóstico de patógenos animais economicamente ou zoonoticamente relevantes recebendo pouca atenção. Da urina, órgãos, sêmen, sangue e mucosa intestinal, foi extraído DNA das bactérias Leptospira interrogans sorovar Pomona Pomona (com M1 e M2), Brucella melitensis (com M1, M3 e M4), Salmonella ser. Abortusequi (M1 e M4), e da Leishmania spp. (M1, M3 e M4) e Eimeria spp. (M1 e M3), respectivamente. A sensibilidade dos protocolos foi analisada por PCR. O método M1 demonstrou sensibilidade semelhante para S. Abortusequi, Leishmania spp. e Eimeria spp., sendo melhor para L. interrogans e ligeiramente inferior para B. melitensis. Pela primeira vez, um método simples e barato de extração de DNA foi utilizado com sucesso nesses patógenos veterinários, especialmente importante em laboratórios com poucos recursos econômicos, contribuindo para o diagnóstico de leptospirose, brucelose, leishmaniose e coccidiose, bem como para a epidemiologia molecular de salmonelose em amostras de sêmen equino. Molecular tools have improved conventional veterinary diagnosis. Acid nucleic extraction is a key step for downstream applications. This work aimed to compare the DNA extraction method Chelex-100 resin (M1) with Whatman® cards (M2), phenol-chloroform (M3), or commercial kits (M4), and to determine the most sensitive and inexpensive one for its diagnosis of animal pathogens that, despite their economic or zoonotic relevance, receive little attention. DNA was isolated from urine, organs, semen, blood and intestinal mucous, from the bacteria Leptospira interrogans serovar Pomona Pomona (by M1 and M2), Brucella melitensis (by M1, M3 and M4), and Salmonella ser. Abortusequi (by M1 and M4), and the parasites Leishmania spp. (by M1, M3 and M4), and Eimeria spp. (by M1 and M3), respectively. The sensitivity of each method was assayed by Polymerase Chain Reaction (PCR). The M1 showed similar sensitivity for Salmonella ser. Abortusequi, Leishmania spp., and Eimeria spp., being better for L. interrogans serovar Pomona Pomona and slightly lower for B. melitensis. For the first time, a simple and economic method was successfully employed for extracting DNA from these animal pathogens, especially important in low-resource settings, contributing to the diagnosis of leptospirosis, brucellosis, leishmaniasis, and coccidiosis; as well as to the molecular epidemiology of salmonellosis in stallion from semen samples. Las técnicas moleculares han contribuido a mejorar el diagnóstico veterinario tradicional y la extracción de ácidos nucleicos es determinante. El objetivo de este trabajo fue comparar el método de extracción de ADN Chelex-100 (M1) con papel Whatman (M2), fenol-cloroformo (M3) o kits comerciales (M4), y determinar un método sensible y de bajo costo para el diagnóstico de patógenos de animales económica o zoonóticamente relevantes y que reciben poca atención. A partir de orina, órganos, semen, sangre y mucosa intestinal se extrajo el ADN de las bacterias Leptospira interrogans serovar Pomona Pomona (con M1 y M2), Brucella melitensis (con M1, M3 y M4), Salmonella ser. Abortusequi (M1 y M4), y de los parásitos Leishmania spp. (M1, M3 y M4) y Eimeria spp. (M1 y M3), respectivamente. La sensibilidad de los protocolos fue analizada por PCR. El método M1 demostró una sensibilidad similar para S. Abortusequi, Leishmania spp. y Eimeria spp., siendo mejor para L. interrogans y levemente menor para B. melitensis. Por primera vez se usó exitosamente en estos patógenos veterinarios un método simple y económico para extraer ADN, especialmente importante en laboratorios de bajos recursos económicos, contribuyendo al diagnóstico de leptospirosis, brucelosis, leishmaniasis y coccidiosis, así como también a la epidemiología molecular de salmonelosis en muestras de semen de caballos. Universidad Nacional del Litoral 2021-04-06 info:eu-repo/semantics/article info:eu-repo/semantics/publishedVersion artículo Articulo info:ar-repo/semantics/artículo Artículo original Original article application/pdf application/pdf https://bibliotecavirtual.unl.edu.ar/publicaciones/index.php/FAVEveterinaria/article/view/9724 10.14409/favecv.v20i1.9724 FAVE Sección Ciencias Veterinarias; Vol 20 No 1 (2021): FAVE Sección Ciencias Veterinarias; 26-33 FAVE Sección Ciencias Veterinarias; Vol. 20 Núm. 1 (2021): FAVE Sección Ciencias Veterinarias; 26-33 FAVE Sección Ciencias Veterinarias; v. 20 n. 1 (2021): FAVE Sección Ciencias Veterinarias; 26-33 2362-5589 1666-938X 10.14409/favecv.v20i1 eng spa info:eu-repo/grantAgreement/EC/FP7/ https://bibliotecavirtual.unl.edu.ar/publicaciones/index.php/FAVEveterinaria/article/view/9724/13541 https://bibliotecavirtual.unl.edu.ar/publicaciones/index.php/FAVEveterinaria/article/view/9724/13542 info:eu-repo/semantics/openAccess Derechos de autor 2021 Mariela Luján TOMAZIC, Micaela HAMER, Carla Paola BUSTOS, Matías ARREGUI, Mariano ASCENCIO, Vanina SARAULLO, Olivia WATANABE, Bibiana BRIHUEGA, Anabel Elisa RODRIGUEZ, Sylvia GRUNE-LOFFLER http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/4.0 |
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