Vista MARC: Producción de partículas virales pseudotipadas SARS-CoV-2 para la evaluación de nuevas terapias para COVID-19

Producción de partículas virales pseudotipadas SARS-CoV-2 para la evaluación de nuevas terapias para COVID-19

A imunoterapia passiva como tratamento contra o vírus SARS-CoV-2 (síndrome respiratória aguda grave coronavírus-2) requer a quantificação da capacidade neutralizante dos anticorpos para o desenvolvimento de terapias eficazes. Para isso, é necessário o uso de partículas virais pseudotipadas não repli...

Descripción completa

Guardado en:

Detalles Bibliográficos
Autores Principales:	ETCHEVERS, Lucas, SILVESTRINI, Paula, VELAZQUEZ, Natalia, BARAVALLE, María Eugenia, RENNA, María Sol, OLMOS, Florencia Martín, ORTEGA, Hugo H., MARELLI, Belkis
Formato:	Artículo revista
Lenguaje:	spa
Publicado:	Universidad Nacional del Litoral 2022
Acceso en línea:	https://bibliotecavirtual.unl.edu.ar/publicaciones/index.php/FAVEveterinaria/article/view/11544

id	oai:bibliotecavirtual.unl.edu.ar:article-11544
recordtype	dspace
institution	Universidad Nacional del Litoral
collection	Publicaciones periódicas
language	spa
format	Artículo revista
description	A imunoterapia passiva como tratamento contra o vírus SARS-CoV-2 (síndrome respiratória aguda grave coronavírus-2) requer a quantificação da capacidade neutralizante dos anticorpos para o desenvolvimento de terapias eficazes. Para isso, é necessário o uso de partículas virais pseudotipadas não replicativas. No entanto, os reagentes de transfecção necessários para sua produção são caros e, consequentemente, é uma limitação na hora de escalonar a produção. Uma forma de contornar essa limitação é o uso da polietilenoimina (PEI), um polímero catiônico de baixo custo. O objetivo do trabalho foi otimizar um ensaio de transfecção transitória de baixo custo para produzir pseudopartículas virais que expressam a proteína Spike do vírus SARS-CoV-2. Os ensaios de transfecção foram realizados em células HEK-293T avaliando diferentes concentrações de PEI e tempos de incubação. A transfecção foi avaliada por microscopia de epifluorescência e citometria de fluxo, mostrando que a condição de transfecção que tendeu a produzir os melhores resultados foi após 48 horas de incubação usando uma razão 1/10 (pDNA/PEI). Em conclusão, foi possível adaptar um protocolo para produzir partículas lentivirais que expressam Spike usando um reagente de transfecção de baixo custo. Isso permitiria que a produção fosse ampliada para posteriormente projetar uma plataforma para avaliar terapias para o COVID-19.
author	ETCHEVERS, Lucas SILVESTRINI, Paula VELAZQUEZ, Natalia BARAVALLE, María Eugenia RENNA, María Sol OLMOS, Florencia Martín ORTEGA, Hugo H. MARELLI, Belkis
spellingShingle	ETCHEVERS, Lucas SILVESTRINI, Paula VELAZQUEZ, Natalia BARAVALLE, María Eugenia RENNA, María Sol OLMOS, Florencia Martín ORTEGA, Hugo H. MARELLI, Belkis Producción de partículas virales pseudotipadas SARS-CoV-2 para la evaluación de nuevas terapias para COVID-19
author_facet	ETCHEVERS, Lucas SILVESTRINI, Paula VELAZQUEZ, Natalia BARAVALLE, María Eugenia RENNA, María Sol OLMOS, Florencia Martín ORTEGA, Hugo H. MARELLI, Belkis
author_sort	ETCHEVERS, Lucas
title	Producción de partículas virales pseudotipadas SARS-CoV-2 para la evaluación de nuevas terapias para COVID-19
title_short	Producción de partículas virales pseudotipadas SARS-CoV-2 para la evaluación de nuevas terapias para COVID-19
title_full	Producción de partículas virales pseudotipadas SARS-CoV-2 para la evaluación de nuevas terapias para COVID-19
title_fullStr	Producción de partículas virales pseudotipadas SARS-CoV-2 para la evaluación de nuevas terapias para COVID-19
title_full_unstemmed	Producción de partículas virales pseudotipadas SARS-CoV-2 para la evaluación de nuevas terapias para COVID-19
title_sort	producción de partículas virales pseudotipadas sars-cov-2 para la evaluación de nuevas terapias para covid-19
publisher	Universidad Nacional del Litoral
publishDate	2022
url	https://bibliotecavirtual.unl.edu.ar/publicaciones/index.php/FAVEveterinaria/article/view/11544
_version_	1736973468911534080
spelling	oai:bibliotecavirtual.unl.edu.ar:article-115442022-05-24T17:11:42Z Producción de partículas virales pseudotipadas SARS-CoV-2 para la evaluación de nuevas terapias para COVID-19 Produção de partículas virais pseudotipadas SARS-CoV-2 para avaliação de novas terapias para COVID-19 Production of SARS-CoV-2 pseudotyped viral particles for the evaluation of new therapies against COVID-19 ETCHEVERS, Lucas SILVESTRINI, Paula VELAZQUEZ, Natalia BARAVALLE, María Eugenia RENNA, María Sol OLMOS, Florencia Martín ORTEGA, Hugo H. MARELLI, Belkis A imunoterapia passiva como tratamento contra o vírus SARS-CoV-2 (síndrome respiratória aguda grave coronavírus-2) requer a quantificação da capacidade neutralizante dos anticorpos para o desenvolvimento de terapias eficazes. Para isso, é necessário o uso de partículas virais pseudotipadas não replicativas. No entanto, os reagentes de transfecção necessários para sua produção são caros e, consequentemente, é uma limitação na hora de escalonar a produção. Uma forma de contornar essa limitação é o uso da polietilenoimina (PEI), um polímero catiônico de baixo custo. O objetivo do trabalho foi otimizar um ensaio de transfecção transitória de baixo custo para produzir pseudopartículas virais que expressam a proteína Spike do vírus SARS-CoV-2. Os ensaios de transfecção foram realizados em células HEK-293T avaliando diferentes concentrações de PEI e tempos de incubação. A transfecção foi avaliada por microscopia de epifluorescência e citometria de fluxo, mostrando que a condição de transfecção que tendeu a produzir os melhores resultados foi após 48 horas de incubação usando uma razão 1/10 (pDNA/PEI). Em conclusão, foi possível adaptar um protocolo para produzir partículas lentivirais que expressam Spike usando um reagente de transfecção de baixo custo. Isso permitiria que a produção fosse ampliada para posteriormente projetar uma plataforma para avaliar terapias para o COVID-19. Passive immunotherapy as a treatment against SARS-CoV-2 (severe acute respiratory syndrome coronavirus-2) requires to quantify neutralizing capacity of antibodies for development of effective therapies. However, the transfection reagents necessary for its production are expensive and, consequently, it is a limitation for the scaling up production. Using of polyethyleneimine (PEI), a low-cost cationic polymer, allows to avoid this. The objective of this work was to optimize a low-cost transient transfection assay to produce pseudoparticles that express the Spike protein of SARS-CoV-2. Transfection assays were performed in HEK-293T cells treated with different PEI concentrations and evaluating different incubation times. Transfection was assesed by epifluorescence microscopy and flow cytometry, showing that the transfection condition that tends to yield better results was after 48 hours of incubation using a 1/10 ratio (pDNA / PEI). In conclusion, it has been possible to adapt a protocol to produce spike-expressing lentiviral particles using a low-cost transfection reagent. This would allow to scale up the production and, following, to design a platform for evaluation of COVID-19 therapies. La inmunoterapia pasiva como tratamiento contra el virus SARS-CoV-2 (del inglés, severe acute respiratory syndrome coronavirus-2) requiere de la cuantificación de la capacidad neutralizante de los anticuerpos para el desarrollo de terapias efectivas. Para ello, es necesario el uso de partículas virales pseudotipadas no replicativas. Sin embargo, los reactivos de transfección necesarios para su producción son costosos y, en consecuencia, resulta una limitante al momento de escalar la producción. Una manera de eludir esta limitante es el uso de la polietilenimina (PEI), un polímero catiónico de bajo costo. El objetivo del trabajo consistió en optimizar un ensayo de transfección transitoria de bajo costo para producir pseudopartículas virales que expresen la proteína Spike del virus SARS-CoV-2. Se realizaron ensayos de transfección en células HEK-293T evaluando diferentes concentraciones de PEI y tiempos de incubación. La transfección se evaluó mediante microscopía de epifluorescencia y citometría de flujo, mostrando que la condición de transfección que tiende a arrojar mejores resultados fue luego de 48 horas de incubación utilizando una relación 1/10 (ADNp/PEI). En conclusión, se ha logrado adaptar un protocolo para producir partículas lentivirales que expresan Spike utilizando un reactivo de transfección de bajo costo. Esto permitiría escalar la producción para, posteriormente, diseñar una plataforma para evaluar terapias para COVID-19. Universidad Nacional del Litoral 2022-05-24 info:eu-repo/semantics/article info:eu-repo/semantics/publishedVersion artículo Articulo info:ar-repo/semantics/artículo Artículo original Original article application/pdf https://bibliotecavirtual.unl.edu.ar/publicaciones/index.php/FAVEveterinaria/article/view/11544 10.14409/favecv.2021.Suppl..44-50 FAVE Sección Ciencias Veterinarias; Vol. 20 Núm. Suppl. (2021): FAVE Sección Ciencias Veterinarias - Suplemento; 44-50 FAVE Sección Ciencias Veterinarias; Vol 20 No Suppl. (2021): FAVE Sección Ciencias Veterinarias - Supplement; 44-50 FAVE Sección Ciencias Veterinarias; v. 20 n. Suppl. (2021): FAVE Sección Ciencias Veterinarias - Suplemento; 44-50 2362-5589 1666-938X 10.14409/favecv.v20iSuppl. spa info:eu-repo/grantAgreement/EC/FP7/ https://bibliotecavirtual.unl.edu.ar/publicaciones/index.php/FAVEveterinaria/article/view/11544/15699 /ref/Abe K, Li Z, Samson R, Samavarchi-Tehrani P, Valcourt E, Wood H, Budylowski P, Dupuis A, Girardin R, Rathod B, Wang J, Barrios-Rodiles M, Colwill K, McGeer A, Mubareka S, Gommerman J, Durocher Y, Ostrowski M,. McDonough K,. Drebot M, Drews S, Rini J, Gingras A. 2020. JCI Insight 5(19): e142362. /ref/Aslan H, Zilberman Y, Arbeli V, Sheyn D, Matan Y, Liebergall M, Li JZ, Helm GA, Gazit D, Gazit Z. 2006. Nucleofection-Based Ex Vivo Nonviral Gene Delivery to Human Stem Cells as a Platform for Tissue Regeneration. Tissue Eng. 12: 877-889. /ref/Bošnjak B, Stein S, Willenzon S, Cordes A, Puppe W, Bernhardt G, Ravens I, Ritter C, Schultze-Florey CR, Gödecke N, Martens J, Kleine-Weber H, Hoffmann M, Cossmann A, Yilmaz M, Pink I, Hoeper MM, Behrens GMN, Pöhlmann S, Blasczyk R, SchulzTF, Förster R. 2021. Low serum neutralizing anti-SARS-CoV-2 S antibody levels in mildly affected COVID-19 convalescent patients revealed by two different detection methods. Cell Mol. Immunol. 18(4): 936-944. /ref/Burgos LM, Diez M, Villalba L, Miranda RM, Belardi J. 2020. Impacto de la pandemia por COVID-19 en las hospitalizaciones por insuficiencia cardíaca. Medicina (B. Aires) 80: 315-316. /ref/Czakó R, Vogel L, Lamirande EW, Bock KW, Moore IN, Ellebedy AH, Ahmed R, Mehle A, Subbaraoa K. 2017. In Vivo Imaging of Influenza Virus Infection in Immunized Mice. mBio 8: e00714-17. /ref/Chung JY, Thone MN, Kwon YJ. 2021. COVID-19 vaccines: The status and perspectives in delivery points of view. Adv. Drug Deliv. Rev. 170: 1-25. /ref/Crawford KHD, Eguia R, Dingens AS, Loes AN, Malone KD, Wolf CR, Chu HY, Tortorici MA, Veesler D, Murphy M, Pettie D, King NP, Balazs AB, Bloom JD. 2020. Protocol and Reagents for Pseudotyping Lentiviral Particles with SARS-CoV-2 Spike Protein for Neutralization Assays. Viruses 12: 513. /ref/Ehrhardt C, Schmolke M, Matzke A, Knoblauch A, Will C, Wixler V, Ludwig S. 2006. Polyethylenimine, a cost-effective transfection reagent. Signal Transduct. 6: 179-184. Fontanet A, Cauchemez S. 2020. COVID-19 herd immunity: where are we? Nat. Rev. Immunol. 20:583-584. /ref/Hiriart Y, Pardo R, Bukata L, Lauché C, Muñoz L, Colonna M, Goldbaum F, Sanguineti S, Zylberman V. 2018. Development of a product anti-Shiga toxin for prevention of the hemolytic uremic syndrome. Medicina (B. Aires) 78: 107-112. /ref/Huang X, Hartley A-V, Yin Y, Herskowitz JH, Lah JJ, Ressler KJ. 2013. AAV2 production with optimized N/P ratio and PEI-mediated transfection results in low toxicity and high titer for in vitro and in vivo applications. J. Virol. Methods 193: 270-277. /ref/Johnson MC, Lyddon TD, Suarez R, Salcedo B, LePique M, Graham M, Ricana C, Robinson C, Ritter DG. 2020. Optimized Pseudotyping Conditions for the SARS-COV-2 Spike Glycoprotein. J. Virol. 94: e01062-20. /ref/Mendoza-Pinto C, García-Carrasco M, Munguía Realpozo P, Méndez-Martínez S. 2021. Opciones terapéuticas en el manejo de la COVID-19 grave: una perspectiva de Reumatología. Reumatol. Clin. 17: 431-436. /ref/Nie J, Li Q, Wu J, Zhao C, Hao H, Liu H, Zhang L, Nie L, Qin H, Wang M, Lu Q, Li X, Sun Q, Liu J, Fan C, Huang W, Xu M, Wang Y. 2020. Quantification of SARS-CoV-2 neutralizing antibody by a pseudotyped virus-based assay. Nat. Protoc. 15: 3699-3715. /ref/Okba NMA, Müller MA, Li W, Wang C, GeurtsvanKessel CH, Corman VM, Lamers MM, Sikkema RS, de Bruin E, Chandler FD, Yazdanpanah Y, Le Hingrat Q, Descamps D, Houhou-Fidouh N, Reusken CBEM, Bosch B-J, Drosten C, Koopmans MPG, Haagmans BL. 2020. Severe Acute Respiratory Syndrome Coronavirus 2−Specific Antibody Responses in Coronavirus Disease Patients. Emerg. Infect. Dis. 26: 1478-1488. /ref/Rogers TF, Zhao F, Huang D, Beutler N, Burns A, He W, Limbo O, Smith C, Song G, Woehl J, Yang L, Abbott RK, Callaghan S, Garcia E, Hurtado J, Parren M, Peng L, Ramirez S, Ricketts J, Ricciardi MJ, Rawlings SA, Wu NC, Yuan M, Smith DM, Nemazee D, Teijaro JR, Voss JE, Wilson IA, Andrabi R, Briney B, Landais E, Sok D, Jardine JG, Burton DR. 2020. Isolation of potent SARS-CoV-2 neutralizing antibodies and protection from disease in a small animal model. Science 369: 956-963. /ref/Seidman CE, Struhl K, Sheen J, Jessen T. 2001. Introduction of Plasmid DNA into Cells. En: Current Protocols in Molecular Biology. Chapter 1:Unit1.8. Ed. John Wiley & Sons, Inc., Hoboken, Nueva Jersey, Estados Unidos. /ref/Suthar MS, Zimmerman MG, Kauffman RC, Mantus G, Linderman SL, Hudson WH, Vanderheiden A, Nyhoff L, Davis CW, Adekunle O, Affer M, Sherman M, Reynolds S, Verkerke HP, Alter DN, Guarner J, Bryksin J, Horwath MC, Arthur CM, Saakadze N, Smith GH, Edupuganti S, Scherer EM, Hellmeister K, Cheng A, Morales JA, Neish AS, Stowell SR, Frank F, Ortlund E, Anderson EJ, Menachery VD, Rouphael N, Mehta AK, Stephens DS, Ahmed R, Roback JD, Wrammert J. 2020. Rapid Generation of Neutralizing Antibody Responses in COVID-19 Patients. Cell Reports Med. 1: 100040. /ref/Vanderheiden A, Edara VV, Floyd K, Kauffman RC, Mantus G, Anderson E, Rouphael N, Edupuganti S, Shi P, Menachery VD, Wrammert J, Suthar MS. 2020. Development of a Rapid Focus Reduction Neutralization Test Assay for Measuring SARS‐CoV‐2 Neutralizing Antibodies. Curr. Protoc. Immunol. 131: e116. /ref/von Rhein C, Scholz T, Henss L, Kronstein-Wiedemann R, Schwarz T, Rodionov R, Corman V, Tonn T, Schnierle B. 2021. Comparison of potency assays to assess SARS-CoV-2 neutralizing antibody capacity in COVID-19 convalescent plasma. J. Virol. Methods. 288: 114031. /ref/Wang M-Y, Zhao R, Gao L-J, Gao X-F, Wang D-P, Cao J-M. 2020. SARS-CoV-2: Structure, Biology, and Structure-Based Therapeutics Development. Front Cell Infect Microbiol. 10: 587269. /ref/Yang S, Zhou X, Li R, Fu X, Sun P. 2017. Optimized PEI-based Transfection Method for Transient Transfection and Lentiviral Production. Curr. Protoc. Chem. Biol. 9: 147-157. /ref/Zylberman V, Sanguineti S, Pontoriero A V, Higa S V, Cerutti ML, Seijo SMM, Pardo R, Muñoz L, Acuña Intrieri ME, Alzogaray VA, Avaro MM, Benedetti E, Berguer PM, Bocanera L, Bukata L, Bustelo MS, Campos AM, Colonna M, Correa E, Cragnaz L, Dattero ME, Dellafiore M, Foscaldi S, González J V, Guerra LL, Klinke S, Labanda MS, Lauché C, López JC, Martínez AM, Otero LH, Peyric EH, Ponziani PF, Ramondino R, Rinaldi J, Rodríguez S, Russo JE, Russo ML, Saavedra SL, Seigelchifer M, Sosa S, Vilariño C, López Biscayart P, Corley E, Spatz L, Baumeister EG, Goldbaum FA, Virosis S. 2020. Development of a hyperimmune equine serum therapy for COVID-19 in argentina. Medicina (B. Aires) 80: 1-6. info:eu-repo/semantics/openAccess Derechos de autor 2022 Lucas ETCHEVERS, Paula SILVESTRINI, Natalia VELAZQUEZ, María Eugenia BARAVALLE, María Sol RENNA, Florencia Martín OLMOS, Hugo H. ORTEGA, Belkis MARELLI http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/4.0
score	11.8626

Producción de partículas virales pseudotipadas SARS-CoV-2 para la evaluación de nuevas terapias para COVID-19

Ejemplares similares