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Desarrollo de una plataforma tecnológica innovadora para producción de vacunas virales recombinantes. Su aplicación al virus de la rabia

Fil: Fontana, Diego Sebastián. Universidad Nacional del Litoral. Facultad de Bioquímica y Ciencias Biológicas; Argentina.

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Detalles Bibliográficos
Autor Principal: Fontana, Diego Sebastián
Otros Autores: Prieto, Claudio
Formato: Tesis
Lenguaje:Spanish
Spanish
Publicado: 2016
Materias:
Vaccine
Rabies
Virus-like particles
Cell culture
Bioreactor
Vacuna
Rabia
Partículas psuedorivales
Cultivos celulares
Biorreactor
Acceso en línea:http://hdl.handle.net/11185/832
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Fontana, Diego Sebastián
Desarrollo de una plataforma tecnológica innovadora para producción de vacunas virales recombinantes. Su aplicación al virus de la rabia
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spelling oai:bibliotecavirtual.unl.edu.ar-handle:11185-8322022-03-17T17:48:04Z Desarrollo de una plataforma tecnológica innovadora para producción de vacunas virales recombinantes. Su aplicación al virus de la rabia Development of a innovative platform for the production of viral recombinant vaccines. Its application to the rabies virus Fontana, Diego Sebastián Prieto, Claudio Taboga, Oscar Rodríguez, María Eugenia Bocco, José Luis Etcheverrigaray, Marina Vaccine Rabies Virus-like particles Cell culture Bioreactor Vacuna Rabia Partículas psuedorivales Cultivos celulares Biorreactor Fil: Fontana, Diego Sebastián. Universidad Nacional del Litoral. Facultad de Bioquímica y Ciencias Biológicas; Argentina. El objetivo principal de la presente tesis consistió en desarrollar una vacuna de nueva generación para rabia, basada en la expresión de virus-like particles (RV-VLPs) en células de mamífero. En una primera etapa de trabajo, se evaluó la expresión de RV VLPs en tres líneas celulares distintas: HEK293, BHK-21 y VERO. La expresión de la glicoproteína G fue confirmada por citometría de flujo, microscopía de fluorescencia y ELISA. De los resultados obtenidos, se seleccionaron la línea recombinante HEK293 para continuar el trabajo. Posteriormente, se llevó a cabo la caracterización morfológica y fisicoquímica de las RV-VLPs obtenidas y más adelante, se llevó a cabo un protocolo de inmunización en ratones, en donde se pudo concluir que las RV-VLPs son capaces de inducir la producción de anticuerpos neutralizantes. Por otro lado, se llevó a cabo el test de potencia del NIH para vacuna antirrábica confirmando que las RV-VLPs inducen una respuesta inmune protectiva. A partir de esos resultados, se seleccionó un clon celular productor el cual fue adaptado para su crecimiento en suspensión en medio libre de suero. Finalmente, el clon sP2E5 fue cultivado en reactores de 1 y 5 L, operados en modo continuo, confirmando que las RV-VLPs son producidas durante todas las etapas de cultivo, el cual puede mantenerse por tiempos prolongados, demostrando de esta forma la elevada productividad del proceso. En conclusión, todos los resultados obtenidos durante este trabajo de tesis confirmaron que el proceso desarrollado constituye una plataforma de producción de una vacuna antirrábica de última generación, totalmente biosegura. The main goal of this thesis was to develop a new generation vaccine for rabies, based on the expression of virus-like particles (RV-VLPs) in mammalian cells. In a first stage of work, the expression of RV VLPs in three different cell lines, HEK293, VERO and BHK-21, was evaluated. The glycoprotein G expression was confirmed by flow cytometry, fluorescence microscopy and ELISA. From the results obtained, the recombinant HEK293 line was selected for further work. Subsequently, it was performed the morphological and physicochemical characterization of the RV-VLPs obtained and, later, we performed an immunization protocol in mice, where it was concluded that the RV-VLPs are capable of inducing the production of neutralizing antibodies. On the other hand, it was carried out the NIH potency test for rabies vaccine confirming that the RV-VLPs induce a protective immune response. From these results, a producer cell clone which was adapted for growth in suspension with serum free medium was selected. Finally, the clone sP2E5 was cultured in 1 and 5 L bioreactors, operated in continuous mode, confirming that RV-VLPs are produced during all stages of culture, which can be maintained for long periods, thus demonstrating the high productivity of process. In conclusion, the results obtained during this thesis confirmed that the process developed is a platform for production of a new generation rabies vaccine, totally biosecure. Universidad Nacional del Litoral Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas 2016-07-19 2016-07-19 2016-03-22 info:eu-repo/semantics/doctoralThesis info:ar-repo/semantics/tesis doctoral info:eu-repo/semantics/acceptedVersion SNRD http://hdl.handle.net/11185/832 spa spa info:eu-repo/semantics/openAccess http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/deed.es application/pdf
score 11.8626

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