Síntesis de novo del gen que codifica Hidrofobina I (HFBI) de Trichoderma reesei HFBI como partner de fusión a β-1,3-glucanasas. Purificación en un paso de la proteína de fusión y evaluación de su utilidad en la degradación de β-1,3-glucanos.
En esta tesis se consiguió realizar la síntesis de novo del gen que codifica la HFBI de Trichoderma reesei y confirmar su identidad mediante secuenciación. Se realizó el subclonado del gen hfbi fusionado a un linker de glicinas, seguido de las secuencias codificantes de las enzimas EgGH64 y NΔEgGH64...
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| Otros Autores: | , |
| Formato: | Tesis Libro |
| Lenguaje: | Español |
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| Sumario: | En esta tesis se consiguió realizar la síntesis de novo del gen que codifica la HFBI de Trichoderma reesei y confirmar su identidad mediante secuenciación. Se realizó el subclonado del gen hfbi fusionado a un linker de glicinas, seguido de las secuencias codificantes de las enzimas EgGH64 y NΔEgGH64. Se logró expresar por primera vez en células de E. coli Shuffle (DE3) la proteína de fusión EgGH64-HFBI de forma soluble. Se confirmó que la proteína EgGH64- HFBI poseía actividad biológica, tanto para la laminarina, como para el sustrato target de la enzima en Euglena, el paramilón. Utilizando para ello el método de Somogyi-Nelson. A través de modelado molecular utilizando la herramienta bioinformática AlphaFold 2 se observo que se mantiene la estructura perteneciente al dominio GH64 y que la presencia de la HFBI no altera de forma significativa todo el dominio. Finalmente, el alineamiento múltiple de secuencia entre la GH64 de E. gracilis y otras 3 GH64 bacterianas, demostró que existen residuos catalíticos que se encuentran conservados también en la enzima de Euglena. |
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| descripción de la copia: | Lugar de realización: Laboratorio de Enzimología Molecular. Instituto de Agrobiotecnología del Litoral (UNL-CONICET) Disponible sólo en cd. |
| Descripción Física: | 1 cd. il. 12 cm. |
| Formato: | Requerimientos del sistema: lector de Adobe reader. |