Desarrollo de una plataforma analítica para el estudio del perfil de glicosilación de proteínas terapéuticas producidas en células CHO.K1 y su aplicación a la selección de un medio de cultivo para la producción de Etanercept. - Ferrari, Ana
El trabajo consistió en el desarrollo de métodos analíticos basados en cromatografía de intercambio iónico a pH elevado para el estudio del perfil de glicosilación de proteínas terapéuticas expresadas en células CHO.K1. Se desarrolló un método para el análisis de N-glicanos teniendo en cuenta su perfil de cargas, un método para el análisis de N-glicanos teniendo en cuenta su antenaridad, un método para el análisis y cuantificación de monosacáridos y por último un método para el análisis y cuantificación de residuos de ácido siálico. Para ello se emplearon como proteínas modelo el etanercept y la eritropoyetina, que poseen un perfil de glicosilación conocido cualitativa y cuantitativamente. Posteriormente se verificó que el método desarrollado para el análisis y cuantificación de residuos de ácido siálico era exacto, preciso y específico. Por último, los métodos desarrollados se utilizaron para estudiar la calidad del etanercept producido por una línea celular CHO.K1 cultivada en diferentes medios de cultivo. De esta manera fue posible seleccionar uno de los medios de cultivo teniendo en cuenta no solo la productividad de la proteína producida sino también su calidad.