Desarrollo de herramientas moleculares para estrategias de biorefinería : Obtención, purificación y caracterización funcional de enzimas recombinantes para la degradación de lignocelulosa. - Storani, Alem Lic.
Se hace una caracterización bioquímica y estructural de enzimas involucradas en la descomposición y metabolismo de la lignocelulosa perteneciente a Ruminococcus albus 8, uno de los microorganismos ruminales con mayor capacidad de degradación. Específicamente se aborda el análisis de glicosil hidrolasas de diferentes familias como la endoglucanasa GH5 (RalCel5G), la celobiohidrolasa GH48 (RalCel48A), una xilanasa GH10 (RalXyn10A) y dos glicosil fosforilasas de la familia GH94 (RalCBP y RalCDP). Así, el trabajo busca diseñar y producir enzimas recombinantes como herramientas moleculares para realizar la degradación de residuos lignocelulósicos y desarrollar estrategias biotecnológicas para la generación de biocombustibles de segunda generación. Se realiza el clonado molecular de los genes, así como la expresión en sistemas heterólogos de los mismos, la producción recombinante y purificación de las celulasas, xilanasas, y glicosil fosforilasas. Se realiza una caracterización estructural, cinética y de estabilidad en entornos específicos de las enzimas recombinantes. Se realiza un análisis computacional de dominios funcionales y diseño de enzimas mutadas para mejorar la eficiencia catalítica y la estabilidad de las enzimas degradativas de lignocelulosa por ingeniería de proteínas.