Identificación y desarrollo de marcadores de expresión génica y daño genotóxico específico para evaluación del efecto inducido por plaguicidas en Caiman latirostris. - Odetti, Lucia Magdalena
El yacaré overo (Caiman Latirostris; Cocrodylia, Alligatoridae) es una de las dos especies de cocodrilianos que habitan en la República Argentina, distribuyéndose en un área considerablemente amplia del centro-norte del país. Es considerada una especie de vital importancia ecológica y económica en gran parte de América del Sur. Desde hace varios años, muchas de las poblaciones naturales de caimanes se ven afectadas por la pérdida de hábitat como consecuencia de la expansión agrícola y la constante exposición a plaguicidas. El objetivo de este trabajo fue identificar respuestas de daño oxidativo, genotóxico y moleculares de expresión génica específicas como biomarcadores sensibles de exposición a plaguicidas en C. latirostris. En primera instancia se estandarizó la técnica de extracción de ARN en sangre para determinar la presencia de los siguientes genes mediante PCR convencional: catalasa (cat), superóxido dismutasa (sod), glutation S Transferasa (gst), citocromo p450 (p450), y la familia de genes implicados en la vía intrínseca de la apoptosis celular (bcl2, bax, y p53). Luego se validó la técnica PCR cuantitativa en tiempo real para genes cat y sod con el fin de proponer el análisis de su expresión génica como biomarcadores del estrés oxidativo inducidos por estresores ambientales. Se evaluaron los efectos de las formulaciones de glifosato (GLI), cipermetrina (CIP) y clorpirifos (CPF) por separado y en forma de mezclas durante el período embrionario al igual que en juveniles y neonatos en condiciones semi-naturales. Se realizaron cuatro ensayos de exposición a concentraciones recomendadas para su aplicación en cultivos de soja, y como área a fumigarse se consideró la batea de incubación en el ensayo de exposición embrionaria, y la superficie del recinto de experimentación en el ensayo de exposición semi-natural de C. latirostris. Se tomaron muestras de sangre y se determinó el daño al ADN mediante la metodología del ensayo del cometa alcalino en su variante alcalina, el daño oxidativo al ADN a través del ensayo cometa modificado con enzimas de reparación Endonucleasa III y Formamido pirimidina ADN glicosilasa, al igual que la estimación de procesos lipoperoxidación y la actividad de enzimas antioxidantes catalasa y superóxido dismutasa y la expresión de sus genes correspondientes. Además, se analizó el posible efecto sobre el desarrollo de los individuos.